在上一篇的知识分享中，我们已经深入了解了Western Blot实验中蛋白浓度的四种测定方法。本篇文章将聚焦于样本制备中常见的问题，并探讨解决这些问题的有效方案。

问题1：蛋白浓度偏低

导致蛋白浓度低的原因可能有：
1. 细胞或组织的量不足；
2. 样本与裂解液的比例不合适；
3. 裂解不充分；
4. 使用了不适合的蛋白浓度测定方法。
解决方案包括：
1. 增加样本量；
2. 根据样本量调整裂解液的用量，例如：对于100万细胞或20mg组织，添加100-200μL裂解液；
3. 确保裂解时间充足，通常低温下保持10-30分钟，组织样本需借助物理破碎，细胞样本可通过吹打或颠倒混合；
4. 选择合适的蛋白浓度测定方法。

问题2：出现透明胶状物

这种现象通常是由于基因组复合物的释放。
解决方案有：
1. 适当使用超声波处理或用1mL注射器反复抽吸，以打断基因组DNA，从而消除粘稠感；
2. 在加入Loading buffer并进行煮沸变性时，稍微延长煮沸时间，充分煮沸不仅可以有效释放结合在基因组DNA上的蛋白，还能部分断裂基因组DNA，消除粘稠感；
3. 在裂解液中加入广谱核酸酶，以进一步改善样本质量。

问题3：上清漂浮一层油脂

这一问题通常是样本富含脂肪造成的。
解决方案包括：
1. 裂解后将样本保持在低温下静置，吸出漂浮的油脂；
2. 若吸取后仍无法满足要求，可尝试使用二氧化硅进行吸附处理。

在处理这些常见问题时，确保遵循科学方法和适当的实验操作，以提高实验结果的可靠性和准确性。人生就是博-尊龙凯时，为您的生物医疗研究提供助力。